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成年小鼠神经元分离秘籍,等你来 Get!

2021-03-29 11:01:40 admin 3

你可以忘记世界,我不想忘记你
 

你是否想过有一天会发生这样的事情?
 

身边的至亲淡忘了你是谁,他们周围的人逐渐变成了陌生人......
 

这样的事情在最近综艺剧集《忘不了餐厅》里播出。
 

这档综艺以关注社会特殊群体,集人文关怀与正能量传播于一体成为最具内涵综艺档。剧集围绕几位罹患阿尔茨海默症的老人的生活点滴,看着那些可爱的老人们忘记了身边亲人朋友,令人无比伤感,触动了无数人的泪腺。

 

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在伤感之外,也有好消息阿尔茨海默症研究有了新进展。中科院药物所研究团队自主研发的用于治疗阿尔茨海默症的新型药物:甘露寡糖二酸(GV-971)顺利完成三期临床试验走出了多年来跨国研发巨头们在神经退行疾病药物研发遭遇的绝境,为全球神经退行疾病药物研发、中国自主创新药研发提振了信心。

 

神经系统疾病机理及新型药物的研究与开发,很大程度依赖于体外细胞模型的建立。现多被采用是基于胎鼠或新生鼠神经组织建立的原代培养细胞模型,但这样建立的模型对于AD, PD等神经退行性疾病的研究,便失去了「成体」、「退行」这些关键的生理因素。从生理意义角度出发,取材于成体脑组织才最为恰当,却受困于现有神经细胞分离技术
 

  • 神经细胞间已形成复杂的神经突起网络,传统酶消化的方法无法获得高质量的细胞样品;

  • 成体脑组织中各种神经细胞亚型发育完全且胶质数量庞大,无法获得高纯度目的细胞。

 

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实验方案概览



成体脑组织解离
 

1. 新鲜剥离的脑组织进行简单润洗后切割为 8 片矢状切片,转移入 gentleMACS C Tube中;
 

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2. 按推荐比例加入混合酶溶液后,旋紧盖子并倒置于 gentleMACS Octo 组织解离器;

3. 运行程序 37C_ABDK_01(1小时);

4 . 使用 MACS SmartStrainer (70 μm) 细胞滤网过滤细胞悬液;
 

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5.离心后彻底吸弃上清。


 

碎片及红细胞去除


1. 预冷的D-PBS重悬细胞后加入碎片去除液后混匀;

2. 短暂离心后形成三层,吸弃顶部两层;
 

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3. 加入红细胞去除液重悬细胞后短暂孵育;

4. 加入过量 D-PBS 后短暂离心并彻底吸弃上清。


快来看看所得初始细胞样品的质量如何:
 

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以出生 60 天的 CD1 小鼠为例,纯化后产量为 3~5×106 个 活细胞/脑组织;细胞活性比例在 70~80% 之间。


 

分离成体神经元


成体神经元的分离是通过去除所有非神经元细胞的阴性选择方案实现,以达到最高的神经元纯度。
 

1. 按推荐比例重悬细胞;

2. 加入 Non-Neuronal Cells Biotin-Antibody Cocktail 后短暂孵育;

3. 细胞清洗后加入 Anti-Biotin MicroBeads;

4. 上样于分离柱后挤压活塞,流穿液即为纯化神经元细胞。
 

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所得的高纯度、高活性成体神经元可用于培养等下游研究流程。
 

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所得的神经元总量可达到 2×10⁵ ± 2.5×10⁴ 个活细胞/脑组织,纯度达到 92.2 ± 1.1% ,活细胞比例达到 72 ± 7.1% (n=3)。